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利用穴盘育苗筛选抗根肿病大白菜材料的实用技术

大白菜根肿病在全国乃至世界范围内的发生日趋严重,严重影响着大白菜的品质和产量。通过不断试验,探讨出一套利用穴盘育苗筛选大白菜抗根肿病材料的实用技术,以期为大白菜根肿病抗性品种的快速、有效选育提供依据。

目前国内对十字花科根肿病的研究集中在其致病机理及病害防控上,对选育抗病品种这一最为经济有效的防病方法的技术研究却不多。利用基质和穴盘育苗筛选抗根肿病材料对关键环节的技术要求较高,通过2013-2015年3年的试验积累,探讨出一套利用穴盘育苗筛选大白菜抗根肿病材料的实用技术,再结合田间抗性鉴定、单株留种,希望为大白菜根肿病抗性品种的快速、有效选育做出贡献。

1新鲜根肿组织中休眠孢子的分离提纯

接种用休眠孢子最好从新鲜根肿组织中提取,可保证孢子的致病力。为避免其他杂菌、杂物对试验结果的影响,需对休眠孢子进行分离、提纯。根肿组织流水冲洗干净后晾干,-20℃冰箱中冷冻备用。将10 g根肿组织切碎,加50 mL 灭菌水,在研钵中研细或用榨汁机打碎,然后用4层脱脂纱布过滤,将滤液移入一干净的50 mL离心管,3 100 r/min离心15 min,弃上清液,沉淀重溶于50 mL灭菌水,3 100 r/min离心10 min,此步操作重复2次。弃上清液,在沉淀中加5 mL 50%蔗糖溶液,混匀后,3 100 r/min离心10 min,用移液枪把上清液小心移入1支干净的离心管,加30 mL灭菌水,3 100 r/min离心10 min,弃上清液,沉淀重溶于30 mL灭菌水,3 100 r/min离心10 min,此步操作重复2次,最后沉淀溶于5 mL灭菌水,-20℃冰箱中冷冻备用。

2育苗接种专用试验棚的准备

有条件的地区,可利用单独的日光温室或于发病地头建塑料大拱棚,专做抗根肿病材料苗期接种、筛选试验用,同时注意防止休眠孢子的扩散。或做长×宽×高为150 cm×30 cm×120 cm的可移动铝合金棚架,两宽面置外拉门,四面均用60目防虫网罩起。棚架上部设单脊双面屋顶,用塑料膜覆盖防雨。竹条苗床裁成合适大小置于棚底。将网棚置于易于隔离、通风见光良好的地块,内挂2块黄板,处于网棚中上部位置。网棚周围铺0.5 m石灰条带防止孢子扩散。当外界温度高于25℃时,棚顶要覆遮光率50%的遮阳网遮光。

3带菌基质配制及材料播种

3.1 带菌基质配制

大白菜一般用50穴穴盘育苗,旧穴盘要用50%百菌清可湿性粉剂1 000倍液喷洒消毒、冲洗晾干后方可使用。秋季育苗基质配方为草炭∶蛭石∶珍珠岩=3∶1∶1,春季育苗基质配方为草炭∶蛭石∶珍珠岩=6∶1∶3。装盘时,将菌液稀释后均匀拌入基质,按根肿组织∶基质=1∶20的质量比掺匀。

3.2 播种

华北地区一般春季在2月底3月初,秋季在8月下旬,将试验材料播种于穴盘中,每穴1~2粒,要保证种子的纯度和净度在99%以上。蛭石和珍珠岩(体积比1∶1)覆盖后,将苗盘移到育苗接种专用试验棚苗床上,浇透水,春季覆膜保墒秋季不用。保证棚内夜温16~23℃、昼温20~26℃,温度过低时加盖保温材料,过高时通风及覆遮阳网遮荫。

4播种后管理及伤根处理

  

4.1 播种后苗盘管理

播种后5天左右大白菜即可出苗,要及时揭膜,防止烤苗。子叶展平前及时间苗、移补苗。出苗后视基质含水量,一般每2~3天微喷1次清水,浇水量不宜过大,防止稀释基质中孢子浓度,保持基质湿度60%~70%即可。幼苗第3片真叶展开时,结合浇水,每3~5天喷施1次瑞莱20-10-20通用型肥料1 000倍液。气温高时,浇水次数增加至每天1次,但注意控制喷水量,保持基质湿度70%~80%即可。如网棚中不慎进入害虫,可用1.8%阿维菌素乳油2 000~3 000倍液防治菜青虫、夜蛾等,用10%吡虫啉可湿性粉剂3 000倍液防治蚜虫。

4.2 伤根处理

为提高接种的成功率,出苗后15~20天,在早晨或傍晚进行1次伤根处理。操作时,距白菜幼苗根茎部0.5~1.0 cm,用小刀垂直于穴孔基质表面插下至穴孔底部,注意不要伤及幼苗主根、割破穴盘,一刀即可。伤根后及时浇水。

5统计调查

  

一般出苗后45天左右,感病对照品种全部发病时开始统计调查。由于穴盘育苗的大白菜根系紧紧缠绕基质,不易将根系完全洗出,为保持抗病材料根系的完整性以便定植,采用直接观察根坨法统计:0级,主根、侧根无肿块;1级,侧根有明显肿块,主根无肿块;2级,主根有明显肿块,侧根无肿块;3级,主、侧根均有少量明显肿块;4级,主、侧根均有大量严重肿块。材料抗病性评估标准:高抗,0<病情指数<10;抗病,10≤病情指数<20;耐病,20≤病情指数<30;感病,30≤病情指数≤100。病情指数=[∑(各级发病株数×各病级代表数值)/(调查总数×最高病级代表数值)]×100。调查后的根肿组织可洗净晾干后,冻于-20℃冰箱中留待下次接种用。

6抗病单株的田间鉴定、留种

对于初选出的高抗或抗病单株材料,春季若通过春化处理(种子催芽后,0~3℃冰箱中20天低温处理再播种穴盘),可直接定植于根肿病选种专用试验田进行小株采种,同时进行田间抗病性鉴定、筛选;秋季则先定植于根肿病选种专用试验田,11月下旬经田间抗病性鉴定后,选取母株入窖假植,来年春天再定植进行成株采种。

7穴盘育苗接种法与其他抗性检测方法的比较分析

2013年9月,针对16份大白菜自交系材料对根肿病4号优势生理小种的抗性(接种用病样采自青岛农业科学院试验田),田间种植抗病性鉴定和穴盘育苗接种抗性检测的同时,委托青岛农业大学园艺学院对材料进行抗病主效基因CRa和CRb的PCR检测,结果表明,穴盘育苗接种法与田间抗病性鉴定的结果最相近,比抗病基因PCR检测法的准确率高出11.8%(表1)。

  

与菌土法、蘸根法、浸芽法、注射法等人工接种鉴定方法相比较,穴盘育苗接种直接用草炭配制的基质试验,pH值6.0左右,满足根肿病发病条件,操作简便;筛选出的抗病单株材料由于是穴盘育苗,定植于根肿病选种试验田后缓苗快,成活率高;穴盘育苗微环境的一致性和后继的田间抗病性鉴定,提高了抗病材料筛选的准确率;穴盘育苗便于集约化操作,可同时筛选大量材料,加快了抗病品种选育进程。

  

  

徐立功,山东潍坊市农业科学院,潍坊市胜利东街1921号,261071,E-mail:xlg_28@163.com

韩太利,孙继峰,杨晓东,谭金霞,潍坊市农业科学院

信息来自《长江蔬菜》2017年3月上半月刊

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